GMM（转基因微生物）发酵来源的食品原料安全性评价，通常包括：生产菌株的分类学鉴定、全基因组表征、插入遗传物质评估、毒力基因与耐药基因分析、非预期代谢物分析，以及终原料的毒理学与潜在致敏性评估等等。对于GMM发酵来源的蛋白类原料，下游纯化工艺通常也需经验证，将活的生产微生物、残留宿主细胞DNA、宿主细胞蛋白、培养基污染物及发酵杂质控制至可接受水平，尤其是容易忽略的宿主细胞蛋白（HCP）。

宿主细胞蛋白（Host cell proteins，HCP）是重组蛋白制备过程中宿主产生的工艺相关杂质。在生物制药领域，HCP的存在可能带来潜在安全风险，例如免疫原性、药效降低以及长期副作用，因此即便微量的HCP也需要严格管控。在食品领域，针对GMM发酵生产的蛋白类原料，通常结合蛋白类原料的性质、生产菌株特性、纯化工艺、预期食用暴露量或终产品组成等，进行适当表征，为整体安全性评价提供支撑。

在GRAS申报卷宗中，不同GMM发酵来源的蛋白类原料关于HCP的侧重点不尽相同。【ZMUni中贸合规中心】结合已获FDA无异议回函的部分GRN案例，梳理申报方围绕HCP组分构成、纯化工艺影响、潜在致敏性评估等方面的论述思路，为GMM发酵来源的蛋白类原料申报中相关论述提供参照。

阐明HCP的主要类别

GRN 1171申报物质为非动物源21型胶原蛋白多肽（Non-Animal Type 21 Collagen Polypeptide）。申报方采用SWATH-LC-MS/MS对HCP开展分析，三批次非连续成品共鉴定出98种HCP，以样品总蛋白为基准，总含量为0.28%~0.52%。

FDA要求申报方对检出HCP的种类予以说明。申报方表示，这些HCP包含多种维持细胞稳态所需的蛋白，例如核糖体亚基、转录因子以及其他细胞质蛋白。

关注纯化工艺的影响

GRN 1183申报物质为法夫驹形氏酵母表达、含有莫内林的应乐果甜味蛋白（serendipity berry sweet protein containing monellin expressed in Komagataella phaffii, SBSP，别名Monellin preparation produced by Komagataella phaffii P-MON-040 expressing a gene encoding for a modified monellin）。主要生产工艺包括发酵、离心、膜微滤、膜超滤、喷雾干燥等。在该案例中，FDA要求申报方说明生产工艺是否会造成部分共同纯化的HCP富集。

申报方汇总LC-MS/MS检出的27种蛋白平均含量：目标蛋白莫内林（monellin）平均占产品总蛋白84%，除莫内林以外，所有HCP中单种平均含量最高仅2.4%，仅5种HCP含量＞1%，剩余21种均＜1%，申报方据此认为，检测结果未显示生产工艺导致某一HCP存在显著富集。

论证残留HCP的安全性

GRN 1247申报物质为乳酸克鲁维酵母表达的β-乳球蛋白（β-lactoglobulin produced by Kluyveromyces lactis）。在回函中，FDA要求申报方论述2%~7%的残留蛋白不会对安全性造成影响。

申报方表示2%~7%的少量残留蛋白主要为K. lactis内源宿主细胞蛋白以及发酵来源多肽，这类蛋白表征充分，属于发酵食品蛋白中的典型杂质。生产菌K. lactis具备长期食品安全使用历史，列入EFSA QPS名录，菌株分离自食品相关基质。发酵过程严格管控，下游纯化工序去除生产菌体并尽可能降低HCP残留。申报方完成终产品中HCP潜在致敏性评价，结果表明K. lactis来源蛋白致敏风险较低，该菌种暂无已知致敏历史。

总结

综合以上3个案例可见，对于GMM发酵来源的蛋白类原料，HCP的表征除说明检出的种类和含量外，还可关注以下几点：

1️⃣论述检出HCP的基本类型及特性，为评估成品中蛋白的生物活性和安全性提供依据。

2️⃣HCP分析可结合产品的组分特性和生产工艺，评估纯化阶段是否会造成某一HCP选择性富集。

3️⃣针对HCP残留开展安全性论证，可依托宿主菌种安全背景、工艺控制水平与表征结果，同步开展潜在致敏性评估。